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簡要描述:Western及IP細胞裂解液本產(chǎn)品裂解細胞獲得的裂解產(chǎn)物,可用于PAGE,蛋白印跡(Western Blot),免疫沉淀(immnolprecipitation,IP),免疫共沉淀(co-IP) 和蛋白與多肽的分離純化。
產(chǎn)品分類
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品牌 | Bioss | 貨號 | C-0013 |
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
Western及IP細胞裂解液
保存條件 Store at -20℃ stable for 12 months.
Western及IP細胞裂解液
產(chǎn)品簡介
WIP組織細胞裂解液(Tissue and Cell lysis solution for Western Blot and Immunoprecipitation ),是一種在非變性條件下裂解細胞的裂解液。本產(chǎn)品裂解細胞獲得的裂解產(chǎn)物,可用于PAGE,蛋白印跡(Western Blot),免疫沉淀(immnolprecipitation,IP),免疫共沉淀(co-IP) 和蛋白與多肽的分離純化。
WIP裂解液的主要成分為Tris(pH 7.5,20mM),150mM NaCl,去垢劑Triton X-100以及多種蛋白酶抑制劑,無需自備PMSF、磷酸酶抑制劑等蛋白酶抑制劑。WIP不僅可以用于細胞培養(yǎng)物的裂解,也可直接用于大多數(shù)動物組織的裂解。在有效地裂解組織和細胞的同時,可強烈地抑制蛋白、多肽的降解,并保持原有的分子結構和蛋白間相互作用。
用WIP裂解得到的組織細胞蛋白樣品,可以用博奧森生產(chǎn)的BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的Triton X-100等干擾物質,不能用Bradford試劑盒測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
包裝清單
WIP組織細胞裂解液 30ml
PMSF(100X) 0.3ml
保存條件:
-20°C保存,一年有效。
注意事項:
1.為獲得最佳的實驗效果,可適當分裝使用,以盡量避免反復凍融。
2.PMSF應現(xiàn)用現(xiàn)加。
3.裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或4°C進行。
4.蛋白酶抑制劑均有較高的毒性,為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。一旦直接接觸,請立即用流水沖洗,再向醫(yī)療保健結構咨詢。
二.使用方法說明
1.培養(yǎng)細胞
取出WIP裂解液,待融化后,顛倒混勻數(shù)次,適量分裝凍存。在使用前取出,按比例加入PMSF(使其最終濃度為1mM),混勻,立即使用。
貼壁細胞,去除培養(yǎng)液,用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗2-3遍(如血清中的蛋白沒有干擾,也可以不洗)。按6孔板每孔加入100-200微升的比例加入WIP。用槍吹打數(shù)下,使WIP和細胞充分接觸。通常WIP接觸細胞數(shù)秒后細胞就會被裂解。
懸浮細胞,收集培養(yǎng)細胞,離心去除培養(yǎng)液,用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗2-3遍(如血清中的蛋白沒有干擾,也可以不洗),用手指把細胞用力彈散,按6孔板每孔細胞加入100-200微升的比例加入WIP。如果細胞數(shù)量較大,應按50-100萬細胞/管分裝或根據(jù)細胞數(shù)量按比例增加WIP。用手指輕彈管底以促進WIP和細胞充分接觸,裂解*時應無明顯的細胞顆粒。
裂解物經(jīng)10,000-14,000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
裂解液用量說明:通常6孔板每孔細胞加入100微升裂解液已經(jīng)足夠,但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到150微升或200微升。
2.組織樣品
取Ep管,分別稱重標記,把組織切成小塊裝入Ep管中,稱重。按每20毫克組織加100-200微升的比例加入WIP(如裂解不*,可以適當增加WIP的用量;如需要的蛋白樣品濃度較高,可以適當減少WIP的用量)。用手握式電動組織細胞勻漿器勻漿約1分鐘或直至充分裂解。10,000-14,000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
如果組織樣品本身非常細小,如淋巴細胞,可直接加入WIP裂解,通過振蕩(Vortex)以使樣品裂解*
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